本站原创【中图分类号】R54 【文献标识码】B 【文章编号】1004-7484（2013）04-0256-01
骨组织工程支架材料首先要有良好的细胞相容性,种子细胞能够在支架材料上粘附并生长[1][2].骨组织经脱钙处理形成脱钙骨基质,移植无明显免疫排斥反应[3],有良好的组织相容性.国内外学者将它作为植骨材料进行了大量的实验和临床应用研究.组织工程研究为脱钙骨基质的应用提供了新的思路,即体外分离培养自体细胞,细胞增殖分化后与脱矿骨基质复合,应用于临床修复工作.目前的脱钙骨产品多为异体完全脱钙的骨基质,在本实验中,我们将部分脱钙骨与hADSC：复合,观察部分脱钙骨的细胞相容性.
1.材料与方法
1.1 材料及试剂：人脂肪干细胞：由脂肪抽吸组织中分离、培养.部分脱钙骨：由上海组织工程中心提供.3,3'-dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate（DiO） Mol Probes公司.
1.2 实验方法
1.2.1 hADSCs在部分脱钙骨上粘附率的测定 将第2代hADSCs按5 × 105/0.1 ml/块的浓度接种于5mm × 5mm ×3mm部分脱钙骨支架上,共8块,将细胞支架复合物于37℃ , 5%二氧化碳培养箱中放置4h后,换于另一平皿,加入培养液,将原平皿中加入0.25%胰酶0.02%EDTA,消化收集细胞,计数仪计数,得出流失的细胞量；细胞材料复合物培养24h后,将细胞材料复合物于培养液中轻轻晃动,并换入另一培养皿培养,收集原培养皿培养液,加0.25%胰酶0.02%EDTA于原培养皿中消化收集贴壁的细胞,并与原培养液中细胞一并计数,得出未粘附的细胞数.细胞粘附率等于（接种的细胞数-流失的细胞数-未粘附的细胞）/（接种的细胞数-流失的细胞数）.
1.2.2 ALP定量检测
3.讨论
细胞在材料上的粘附率是评价组织工程支架材料的重要指标,我们检测了人脂肪干细胞在部分脱钙骨上的粘附率.实验结果也表明,人脂肪干细胞能较好地粘附在部分脱钙骨上,在部分脱钙骨的表面及内部孔隙中都能粘附,并能正常生长.符合骨组织工程支架材料的基本要求.人脂肪干细胞与部分脱钙骨的粘附率为96%,与Kasten的研究结果相符合.
ALP是成熟成骨细胞标志酶之一,通过检测成骨的重要指标ALP表明,对成骨诱导的hADSCs在三维立体培养环境下ALP仍呈上升趋势,14d达高峰,随后下降.表明细胞在支架材料上三维诱导培养时仍表达成骨细胞表型,体外实验支持成骨.