优选黄芪皂苷的醇提工艺

摘 要 ：目的：优选黄芪皂苷的醇提工艺.方法：以黄芪皂苷提取率为指标,采用正交设计法对黄芪皂苷的醇提工艺参数进行优化.结果：最佳纯化工艺条件为：80%乙醇常压回流提取2次,第一次乙醇为药材量的10倍,回流90min,第二次为8倍量,回流60min.

关 键 词 ：黄芪；皂苷；醇提工艺；正交设计

中图分类号：G282 文献标识码：A 文章编号：1674-0432（2011）-08-0051-1

黄芪是豆科植物内蒙黄芪和膜夹黄芪的干燥根,有补中益气,利水消肿,固表止汗等功能.主要含三萜皂苷、黄酮类化合物及多糖[1],三萜皂苷中以黄芪甲苷为制剂质量检定的指标成分[2].本实验以黄芪皂苷含量为指标,考察乙醇浓度,乙醇用量,回流时间3个因素对提取黄芪皂苷的影响.

1.仪器、药材、试剂

1.1 仪器

UV-1102紫外分光光度计（上海天美）；RE-52AA型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；S53029H微量取样器（法国）.98-1-B型电子调温电热套（天津市泰斯特仪器有限公司）.

1.2 药材、试剂

黄芪购于白城合力医药药材公司；黄芪甲苷对照品（供含量测定用）,甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯.

2.方法与结果

2.1 方法

根据黄芪皂苷醇提取工艺文献报道及实际生产可行性,确定采用乙醇回流提取次数为2次.考察乙醇浓度,乙醇用量,回流时间3个因素.选用L9（34）正交设计进行实验.每个因素设计3个水平.因素水平见表1.

表1 醇提取工艺因素水平表

2.2 黄芪皂苷含量测定方法

2.2.1 测定条件 依据文献采用比色法测定黄芪皂苷的含量[3].取黄芪甲苷对照品溶液0.1ml,按供试品溶液操作,用紫外分光光度计扫描,在540-580nm有吸收峰.参考有关文献[4],确定检测波长为560nm.

2.2.2 绘制标准曲线 精密秤取黄芪甲苷对照品5.0mg置5ml容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀.分别精密吸取上述溶液0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0ml分别置5ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀.各取3ml,按供试品溶液项下操作.用UV-1102型紫外分光光度计,在560nm波长处测定吸光度值.以黄芪甲苷浓度为横坐标,以吸光度值为纵坐标绘制标准曲线.回归方程为：Y等于 19.721X-0.0819,r等于0.9998,表明黄芪甲苷在10.0-100g/ml范围内呈良好线性关系.

2.3 黄芪皂苷提取

取黄芪20g,按设计条件置1000ml圆底烧瓶中,浸泡3h后,加热回流提取两次,合并二次提取液,脱脂棉滤过,静置24h,取上清液减压滤过,滤液用旋转蒸发仪浓缩至100ml左右,水浴浓缩成稠膏状备用（提取物）.

2.4 样品含量的测定

2.4.1 样品溶液的制备 提取物置于50ml容量瓶中,加甲醇50ml溶解,定容.

2.4.2 测定方法 分别量取样品溶液0.4ml于磨口试管中,水浴挥干甲醇,在每只试管中分别加入0.2ml 5%香草醛冰醋酸液,0.8ml高氯酸液,密塞.于70℃水浴加热20min,取出后立即用流水冷却,加冰醋酸5.0ml摇匀,测吸光度,计算.

表2 醇提取工艺正交实验安排及结果

2.5 结果

对各实验组黄芪皂苷的含量结果进行分析,经统计软件进行统计分析A1、A2、A3均有显著性差异,且A2>A3>A1.故应选择A2,即乙醇浓度为70%；B1与B2、B3间有显著性差异,B2与B3间无显著性差异,且B1>B2>B3,故应选择B1,即乙醇用量为药材量的10,8倍；C1与C2、C3间均无显著性差异,C2与C3间有显著性差异,且C2>C1>C3,故应选择C2,即回流提取时间90min；45min.

故最佳提取工艺为A2B1C2,即用70%乙醇常压回流提取2次,第一次乙醇为药材量的10倍,回流90min,第二次为8倍量,回流45min.