本站原创文章编号：1009-5519（2008）24-3780-02 中图分类号：R9 文献标识码：B
三七降脂胶囊是由三七、决明子、制何首乌、山楂等多味中药组成的复方制剂.具有清热活血、降浊通便之功效.主要用于高血脂症,亦可作为冠心病和高血压的辅助治疗.其中三七为主药,三七中的主要药效成分为三七总皂苷,三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1等.2005版《中华人民共和国药典》已采用这三种成分作为三七原药材的质量控制指标.为控制该产品质量,保证疗效,我们参考相关文献[1~3],用HPLC法对其中的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1进行含量测定.
1.仪器与试药
Agilent1200高效液相色谱仪,G1314B紫外检测器,G1354A 四元泵,G2170BA二维液相色谱软件包(美国Agilent 科技公司)； BRANSONSB3200超声波清洗器；Satorius CP225D电子天平.
三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1对照品（中国药品生物制品检定所,供含量测定用）,乙腈为色谱纯,水为重蒸馏水,其余试剂均为分析纯.
三七降脂胶囊样品（批号为070611、070618、070803、070816、070903、070917）与阴性样品均由江苏江大源生态生物科技有限公司提供.
2.方法与结果
2.1 色谱条件：Kromasil C-18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相：乙腈-0.05%磷酸溶液梯度洗脱；流速：1.0 ml/min；柱温：25 ℃；检测波长：203 nm；进样20 μl.流动相梯度洗脱程序见表1.
2.2 对照品溶液与供试品溶液的制备：精密称取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rg1对照品和人参皂苷Rb1对照品适量,加乙睛-0.05%磷酸水溶液(20:80)制成每1 mL含三七皂苷R1 0.1 mg、人参皂苷Rg1 0.2 mg、人参皂苷Rb1 0.15 mg的混合溶液,即得.取装量差异项下内容物,研细,混匀,精密称取样品0.3 g,置具塞锥形瓶中,精密加入50 ml 75%乙醇,称重,超声1小时,取出,放冷至室温后,称重,用75%乙醇补足减失的重量,精密吸取续滤液25 ml,置水浴上蒸干,用乙睛-0.05%磷酸水溶液(20:80)定容至10 ml,用0.45 μm微孔滤膜过滤,作为供试品溶液.
2.3 阴性试验：取缺三七药材的阴性样品适量.按“2.2”供试品溶液的制备项下制得阴性对照溶液,并分别精密吸取供试品溶液、阴性溶液与对照品溶液,注入色谱仪,结果阴性样品色谱在三种皂苷相应保留时间上没有干扰峰.
2.4 线性关系的考察：标准曲线的绘制：精密吸取不同浓度的对照品溶液注入液相色谱仪,以进样量（μg）为横坐标（X）,以峰面积积分值A为纵坐标（Y）,进行线性回归绘制标准曲线,计算得回归方程,见表2.结果表明三七皂苷R1在0.364~7.28 μg、人参皂苷Rg1在0.98~19.6 μg、人参皂苷Rb1在 0.992~19.84 μg范围内呈良好的线性关系.
2.5 进样精密度试验：精密吸取同一浓度对照品溶液,依法测定,连续进样5次,测定峰面积,其精密度良好,三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的RSD分别为为1.54%、1.69%、1.78%.
2.6 稳定性试验：取同一样品供试液（批号070816）,每隔2小时测定1次,共测6次,其峰面积RSD分别为2.18%、1.47%、1.82%,表明样品在10小时内具有良好的稳定性.
2.7 重复性试验：分别精密称取同一批号（批号070816）样品5份,依法处理,测定,结果样品中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1平均含量分别为5.492、21.816、19.274 mg/g,RSD分别为1.56％、1.73%、2.21%.
2.8 回收率测定：精密称取已知含量的样品（批号070816）5份约0.15 g,分别加入三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1对照品溶液,依法处理,得供试品溶液.依法测定,结果见表3.
2.9 样品测定：分别精密量取不同批号的三七降脂胶囊样品,按供试品溶液制备方法制备,如法测定,结果见表4.
3.讨论
3.1 流动相的选择：曾对乙腈-水、乙腈-甲醇-水、甲醇-水、乙腈-0.1%磷酸溶液、乙腈-0.05%磷酸溶液等流动相分别进行系统筛选优化,最后确定以乙腈-0.05%磷酸溶液为流动相,按正文所述的梯度洗脱程序进行洗脱,能使三种皂苷成分能够达到基线分离,且其他成分对测定无干扰.
3.2 样品提取条件的选择：在研究过程中分别进行了不同溶剂（甲醇、正丁醇）、不同提取方法（加热回流、超声提取）和不同提取时间（0.5、1、1.5 h）的比较,最后确定以75%乙醇超声1 h.