丙酮酸氧化酶速率法在献血员ALT筛查中的应用评价

更新时间:2023-12-30 作者:用户投稿原创标记本站原创 点赞:6938 浏览:21212

【中图分类号】R446.1 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783(2011)02-0136-01

【摘 要 】目的:丙酮酸氧化酶速率法应用于献血员ALT筛查.方法:利用氧化酶丙酮酸生成过氧化氢,过氧化氢与2,4,6三溴-3-羟基笨甲酸和4-氨基比林在过氧化物酶作用下生成红色醌类化合物的原理.结果:该方法线性范围大,灵敏度高,结果准确,重复性好,抗干扰能力强等优点,适合血站大批量标本的检测.

【关 键 词 】丙酮酸氧化酶;献血员;ALT

1.材料和方法

1.1 仪器:

1.1.1 材料和方法

1.1.2 仪器:酶标仪MK3(芬兰丹尼仪器公司);实验室软件Itswell由烟台海参威科技有限公司提供;

1.2 试剂:北京瑞华倍肯医学制剂有限公司(批号:HP90513)

1.3 校准血清由江西瑞华倍肯医学制剂有限公司(批号:HP90201)

1.4 反应原理:

L-丙氨酸+a-酮戊二酸 ALT丙酮酸+L-谷氨酸

丙酮酸+O2+P丙酮酸氧化酶H2O2+乙酰磷酸

H2O2+4AAP+TBHBA过氧化物酶 红色醌类化合物

1.5 测定方法:取96孔酶标板于A1孔加低值校准血清20ul,A2孔加中值校准血清20ul, A3孔加高值校准血清20ul,A4至H12为测定孔,各孔加标本20ul,再全部加酶试剂工作液200 ul,,混匀,37℃反应10min,立即放入37℃酶标仪进行比色,第一次吸光度为A1,3分钟后进行第二次比色,吸光度为A2,主波长为492nm,次波长为620nm,获取各孔吸光度之差(A2-A1),计算:ALT活性(U/L)等于测定孔吸光度/标准孔吸光度*校准血清U/L.

2.实验结果与讨论

2.1 线性:取ALT值高低不同标本15份,用本法测定,测得值见表1,由表1可以看出,在300U/L之内具有良好的线性,对于高值标本,BK测得值会有所偏低,但不会造成检测阴性而导致漏检,为献血员ALT筛查的较为理想方法.


2.2 方法相关性:取12U/L-126U/L共80份,用本法测定,测得与IFCC方法相关系数为r等于0.989,y等于1.075x+1.031

2.3 反应稳定性:上述80份标本,在37℃反应10分钟后,进行0分钟、2分钟、4分钟、6分钟、8分钟、10分钟、13分钟、15分钟、17分钟、19分钟测定,发现0分钟、2分钟、4分钟、6分钟测得基本一致,8分钟以后值偏低,说明0-6分钟之内进行速率测定,结果可靠,在线性期范围内.

2.4 用低中高校准血清各一份,批内重复20次,求x的平均值,S,CV值,批间连续重复测定20次,求x的平均值,S,CV值(表2),由表2可见,本法测定ALT批内、批间CV值均小于5%,显示该方法的精密度和重复性较好.

2.5 灵敏度:与IFCC方法比较,两中方法测定230份大于45U/L的标本,结果见表3,由表3可见,BK试剂用酶标仪测定ALT有较好的敏感性和特异性.

2.6 本法对干扰因素的消除

2.6.1 标本用量减少,本法样本试剂比例1∶10接近LFCC推荐ALT测定参考方式0.083的比例,不仅可确保底物短时间内不被耗尽,防止产生检测阴性而导致漏检,并可相对减少溶血、脂血的干扰.

2.6.2 本法采用速率法,计算上采用第二次OD值减去第一次OD值,可消除中度以下溶血、脂血、胆红素对结果的影响.

2.6.3 使用参考波长620nm,使用双波长测定也可有效克服溶血、脂血的干扰.

3.结论

丙酮酸氧化酶速率法应用于筛查献血员ALT,具有线性范围大,操作简便,快速,结果准确,重复性好和抗干扰性强等优点,该方法能保证37℃的酶反应最佳温度和活性,又保证无高值ALT检测阴性结果的发生,是目前筛查献血员ALT比较理想的选择.

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