本站原创报告编号:20163600SCAU0014
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科技查新报告
项目名称:
委托人:华南农业大学
委托日期:2016年1月日
查新机构(盖章):教育部科技查新工作站(Z10)
查新完成日期:2016年1月日
称教育部科技查新工作站(Z10)通信地址广州市新港西路135号中山大学图书馆邮政编码510275负责人蔡筱青
颜丽君020-84112094传真020-84036935联系人黄春晓020-85281054电子信箱chaxin1909@scau.edu.查新目的
科研立项(申请广东省产学研合作项目)查新项目的科学技术要点
针对大集团养鸡场IBV疫情中类4/91毒株进行分离及部分分离毒株的重要基因进行序列测定与分析,建立起该类病毒株的RT-PCR检测技术及其相关疫苗的抗体水平检测方法,为免疫效果评定建立指标及体系,为大华农公司开发该类疫苗及市场占领与怎么写作提供科学依据和基础.
本项目目标,技术方案总体是收取温氏集团内外养鸡场的相关疫情和病料,进行病毒株的分离和鉴定,通过对毒株重要基因序列的测定,建立起IBV类4/91毒株的检测技术及相关疫苗免疫抗体水平的检测方法,并评定相关疫苗的免疫保护效果,为大华农公司的相关产品开发及推广应用提供科学依据和基础.组织方式是由新兴营销分公司与新兴生药分公司配合快速地获取疫情信息和临床病料,分离出野毒,之后在实验室开展病毒株的鉴定,检测技术等系列,完成疫苗株与野毒株的配型及临床应用评定等工作.
三、查新点与查新要求
查新点:
1.IBV类似4/91病毒野毒株的分离,鉴定及序列测定.
2.IBV类4/91病毒野毒株的检测技术.
3.IBV类4/91病毒疫苗免疫效果的评定和检测方法情况.
查新要求:通过查找国内相关文献,并与本委托方的查新点进行对比分析,证明在国内有无与本委托方的研究相同或类似的文献报道.四,文献检索范围及检索策略
(一)计算机检索范围
1.
维普中文科技期刊全文数据库
1989-2016/1
2.
万方中国学位论文文摘数据库
1984-2016/1
3.
万方中国学术会议论文数据库
1984-2016/1
4.
万方中国科技成果数据库
1984-2016/1
5.
中国期刊网全文数据库
1994-2016/1
6.
中国博士学位论文全文数据库
1999-2016/1
7.
中国优秀硕士学位论文全文数据库
1999-2016/1
8.
中国重要会议论文全文数据库
2000-2016/1
9.
中国科技论文在线
2003-2016/1
10.
中国学术会议在线
2000-2016/1
11.
国家科技图书文献中心(科学技术部)
1989-2016/1
12.
中国专利信息网
1985-2016/1
1.
鸡传染性支气管炎病毒,IBV
2.
4/91,类4/91
3.
分离,鉴定
4.
检测,诊断
5.
疫苗
(三)检索式
1.
(鸡传染性支气管炎病毒orIBV)and(4/91or类4/91)and(分离or鉴定or检测or诊断)
2.
(鸡传染性支气管炎病毒orIBV)and疫苗and检测
五、检索结果
依据上述所列检索范围内进行检索,共检索到与该课题研究相关文献篇,其中主要相关文献篇,一般相关文献篇,现将主要相关文献概述如下:1.陈峰(华南农业大学动物科学学院),吴孔兴,张齐,等.5株传染性支气管炎病毒分离株的鉴定和血清分型[J].华南农业大学学报,2005(04):92-95.
从四川,重庆和广东3个不同地区,不同时间发病的肉鸡中分离出5株病毒.通过鸡胚发育试验,NDV干扰试验,动物回归试验和感染后鸡血清中抗体水平变化确定这5株病毒均为传染性支气管炎病毒.血清中和试验表明,这5株病毒血清型与北京分离的A2株一致,而与H52,H120,M41,T和Holte株不同.该研究结果证实了鸡传染性支气管炎病毒类4/91毒株在我国华南和西南地区的流行.
2.赵继勋,秦卓明(中国农业大学动物医学院).一株类4/91病毒的初步研究[J].中国预防兽医学报,2002(5):360-363.
从发病鸡群中分离到一株病毒,通过鸡胚接种,电镜观察,动物回归试验,气管环交叉中和试验等,初步确定为传染性支气管炎病毒,暂命名为A2.外源病原检查结果为阴性.攻毒试验:在气管,肾以及肌肉等组织均有明显的病变,病理组织观察,在气管,肾脏和肌肉均发生了一定程度的病理变化.利用电泳对传统的病毒株和分离株进行了病毒结构蛋白分析,A2株出现了31kD的特殊蛋白条带.气管环交叉中和试验表明A2株与4/91病毒为同一血清型,临床的动物免疫试验结果表明,4/91疫苗有较好的保护作用.孟凡磊(山东农业大学).IBV793/B株N基因的序列分析及地高辛标记探针,双重RT-PCR检测方法的建立与应用[D].山东农业大学2007.
根据GenBank中已经发表的IBVN基因的保守序列,设计合成一对引物,利用RT-PCR技术扩增IBVN基因的582bp的核酸片段,并制备出地高辛标记的IBV核酸探针.特异性检测结果表明,该探针能与不同毒株的IBV核酸发生特异性杂交,而与对照的NDV,鹅副粘病毒的核酸杂交反应为阴性,敏感性检测结果表明,该探针对IBV的最低检出量为10pg,显示所制备的核酸探针用于IBV的检测是可行的.
参照GenBank已经发表的793/B和多株IBV的N基因和S1基因,设计两对引物,对样品的核酸模板进行扩增,建立了一种能够同时检测鸡传染性支气管炎病毒和鉴定出793/B血清型的双重RT-PCR方法.该方法对793/B血清型可检测到582bp和891bp两条核酸片断,其他的血清型只出现582bp一条核酸片断,而新城疫病毒,传染性喉气管炎,鹅副粘病毒菌未检测到特异型条带.该方法简化了聚合酶链式反应程序和缩短了检测时间..何永强,吴建祥(浙江省农业科学院病毒实验室).肾型鸡传染性支气管炎病毒DQ株S_1基因结构分析[J].浙江农业学报,2001(5)
选用Trizol试剂抽提肾型鸡传染性支气管炎病毒(IBV)DQ株基因组RNA,采用特异性引物通过RT-PCR扩增其S1基因cDNA,克隆入pBluescript质粒载体中,作测序分析.结果表明,DQ株S1基因全长为1731nt,编码一条576个氨基酸组成的多肽,其核苷酸与IBV-4/91,Gray,D41,Beijing,ZJ971,Beaudette,H120,M41毒株的同源性为78.4%～82.73%,氨基酸同源性为74.41%～78.96%.DQ株不同于其它血清型IBV的主要特征为:在S1基因核苷酸序列上,第278-299位之间插入了一段新的序列,第423-431位碱基缺失,有许多点突变,二级结构上表现为第2-22位氨基酸区域,第92-98位氨基酸区域亲水性增强,第74-76位氨基酸区域疏水性增强,最大亲水峰改变.S1分子进化系统分析显示,DQ株与其它各毒株的亲缘关系较远..磨美兰(广西大学动物科学技术学院),李孟,陈秋英,等.引起免疫失败的IBV分离株的生物学特性及结构基因分析[J].基因组学与应用生物学,2016(2):275-280.
本研究应用鸡胚尿囊腔接种的方法,从广西患传染性支气管炎的免疫失败的病鸡中分离到一株传染性支气管炎病毒(IBV)(命名GX-YL5),通过间接血凝试验,动物回归试验和气管环交叉中和试验对该毒株进行鉴定和主要生物学特性的研究,同时利用RT-PCR技术扩增克隆该病毒的S1基因和N基因并测定其核苷酸序列.结果表明:该病毒株有间接血凝性,致病性较强,血清型不同于常用疫苗株H120,Ma5,4/91.同源性分析表明,S1基因核苷酸和氨基酸序列与参考株的同源性分别为63.5%～81.2%和50.7%～78.8%,N基因核苷酸和氨基酸序列与参考株的同源性分别为85.7%～87.2%和89.5%～91.7%,S1基因和N基因系统进化分析表明分离株与其它参考毒株的亲缘关系较远.S1基因和N基因分型与血清学试验结果相吻合.本研究结果提示了广西分离株GX-YL5可能是一个新的变异株,这可能是目前免疫失败的重要因素,同时也为研制适合本地使用的IBV疫苗提供了科学依据和物质基础..周继勇(浙江大学动物预防医学研究所),何永强.肾型鸡传染性支气管炎病毒J株S1基因克隆和序列分析[J].浙江大学学报(农业与生命科学版),2000(4)
采用特异引物对来自浙江地区的肾病型鸡传染性支气管炎病毒(IBV)J株进行RTPCR,将扩增得到的S1基因cDNA克隆入pBluescriptSK质粒载体中,经克隆,鉴定后测序.结果显示,IBVJ株S1基因全长为1731nt,编码一条576个氨基酸组成的多肽,其核苷酸与已报道的IBVM41,H120,Beaudette,Beijing,D41,Gray,4/91毒株的同源性为82.73%～78.42%,有大量的点突变并且伴有基因插入和基因缺失,经S1蛋白分子进化系统分析,提示J株与其它各毒株的亲缘关系较远,为一新的IBV变异株..周全(广东温氏集团研究院禽病研究中心),管凤霞,高恒,等.2株鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及S1基因的序列分析[J].中国畜牧兽医,2016(8):37-40.
采用RT-PCR方法对2株传染性支气管炎病毒分离株的S1基因进行序列扩增,测定及分析,应用DNAStar软件将这些分离毒株与中国常用疫苗毒株,其他血清型的代表参考毒株分别进行核苷酸和氨基酸系统发生进化关系分析.核苷酸与氨基酸序列分析结果均表明:2株分离毒株与J2,Q1,T3毒株的亲缘关系较近,与疫苗株H120和4/91的亲缘关系较远..于申业(山东农业大学).鸡传染性支气管炎病毒793/BRT-PCR检测方法的建立与应用及TA03株S1基因的克隆与表达[D].山东农业大学2006.
2003年刁有祥,杨杰华等从山东省某蛋鸡饲养场产蛋异常下降鸡群中分离到一株793/B传染性支气管炎毒株,命名为TA03株.在前者基础上,我们开展工作,建立了鸡传染性支气管炎病毒(IBV)793/BRT-PCR检测方法并进行了初步的应用,同时成功地实现了IBV793/BTA03株S1基因的克隆与表达.根据GenBank已发表的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)793/BS1基因序列,设计一对引物,扩增891bp特异性核酸片段,建立了检测IBV793/B的RT-PCR方法.特异性试验结果表明,793/B传支病毒能扩增出891bp的核酸片段,而IBVM41,H120,H52毒株以及新城疫病毒(NDV),禽流感病毒(AIV),传染性法氏囊病毒(IBDV)无特异性条带出现.敏感性试验结果表明,该方法的最低检出限量为10pg的模板.表明本试验所建立的RT-PCR方法具有敏感性高,特异性强的特点.利用建立的RT-PCR方法对从山东省分离的8株疑似鸡IBV793/B进行检测,结果7株为阳性..刘兴利(中国农业大学动物医学院),张蕊,张国中,等.鸡传染性支气管炎病毒A2株全基因组序列的测定与分析[C].2016,中国江苏扬州.
鸡传染性支气管炎(AvianInfectiousBronchi-tis,简称IB)是由冠状病毒科冠状病毒属的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)引起鸡的急性,高度接触性传染病,是目前危害我国养禽业的主要疫病之一.鸡传染性支气管炎病毒A2株于1996年分离自国内H120免疫肉鸡群,中和实验及攻毒保护试验结果显示A2株与4/91毒株之间有较高的相关性.分子流行病学分析也表明A2相关毒株占国内分离株60%以上,是国内主要流行IBV毒株.为探索A2类毒株流行的分子基础,本研究进行了A2株全基因组序列的测定与分析,并对其进行传代致弱,旨在制备弱毒疫苗和分析A2毒株毒力,免疫原性变异的分子基础,为国内IB的预防提供现实措施和理论基础.10.陈萍(四川农业大学).间接ELISA检测IBVDNA疫苗免疫抗体及IBVM基因表达研究[D].四川农业大学2005.
本研究采用差速离心和密度梯度离心技术纯化禽传染性支气管炎病毒(IBV),用纯化的IBV作包被抗原,建立了检测IBVDNA疫苗免疫后鸡血清中特异性抗体的间接ELISA方法.确定了抗原最佳包被浓度为5μg/ml,待检血清稀释度为1:320,酶标抗体的最佳稀释度为1:10000,血清样品阴,阳性判断临界值S/N为1.27.应用间接ELISA方法检测IBVDNA疫苗免疫抗体,结果表明:IBV的S1,M,N基因DNA疫苗单独免疫或混合免疫均能刺激机体产生特异性抗体,且DNA疫苗各组抗体水平极显着(P<,0.01)高于空白对照组和空质粒对照组.强毒攻毒实验结果表明:IBV的各DNA疫苗对强毒攻击都有保护率,保护率分别是S1基因40%(8/20),M基因70%(14/20),N基因70%(10/14),三基因混合DNA疫苗90%(18/20).结合抗体检测结果分析得出:三基因混合DNA疫苗免疫效果优于单基因DNA疫苗免疫效果,单基因DNA疫苗中,M基因疫苗和N基因疫苗优于S1基因疫苗.根据本课题组在GeneBank中注册的中国禽传染性支气管炎分离株的8条M基因序列(AY302742～AY302749),设计了一对引物,采用RT-PCR方法,获得了IBV分离株膜蛋白基因(M)的融合表达片段,并将其克隆到pMD18-T载体测序.将此片段插入大肠杆菌原核表达载体pET30b(+)中,构建了表达IBVM基因的重组真核表达质粒pET30-M,转化入大肠杆菌BL21(DE3),并经IPTG进行诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Westernblotting分析表明:M基因在大肠杆菌中获得了表达,表达蛋白分子量约为26KD.在TB培养基,Kna浓度为100μg/ml,温度为30,IPTG浓度为0.4mmol/L的诱导表达条件下,蛋白表达量达到菌体总蛋白的10%.表达的IBVM蛋白可作为制备IB诊断抗原,基因工程疫苗的基础材料.以上研究对IB的诊断,防治有重要理论价值和实用价值.11.刘玉芬(哈尔滨师范大学生命科学与技术学院,黑龙江省动物卫生监督所),刘洪雨,王洋,等.IBV地方分离株SH/03/2006油乳剂灭活疫苗的制备及检测[J].黑龙江畜牧兽医,2016(9):108-109.
鸡传染性支气管炎(infectiousbronchitis,IB)是危害养鸡业的主要传染病之一,该病由传染性支气管
炎病毒(Infectiousbronchitisvirus,IBV)引起.笔者已经分离,鉴定了SH/03/2006IBV毒株[1],现对该毒株的血清学和免疫学特性进行分析,以期获得防治鸡传染性支气管炎疫苗的研究经验.12.裴小英(荷兰BioChekbv公司,荷兰英特威/先灵葆雅动物保健公司),Leerdam,B.,Kuhne,P..理解免疫鸡的ELISA检测结果,判断IBV疫苗的免疫有效性[J].国外畜牧学(猪与禽),2016(2):29-31.
家禽健康管理中的ELISA血清学检测方法已被广泛地应用于众多疾病,如传染性支气管炎病毒(InfectiousBronchitisVirus,IBV).它是一种非常有效的工具,可以用来监测疫苗接种后的免疫应答反应,并可以对该病进行诊断.然而,这只有在对所获得的数据充分了解的情况下才能被有效地利用.
经对上述所列检索范围进行检索,共检索到与该课题研究相关的主要相关文献篇,详见检索结果,一般相关文献篇,详见附件.结合查新点,对所检出的主要相关文献进行对比,分析,结论如下:发病鸡群中血清分与4/91病毒为同一血清型IBV793/B株(IBV)DQ株(IBV)(命名GX-YL5(IBV)J株793/B株,文献9为IBVA2株,这些文献与本委托项目研究的毒株(IBV4/91)不同,本委托项目的研究内容为IBV类似4/91病毒野毒株的分离,鉴定及序列测定及其检测与相关疫苗研发.文献10-13对IBV其它类型疫苗的检测情况,与本委托项目研究的对象(IBV4/91)不同,本委托项目研究IBV类4/91病毒疫苗免疫效果的评定和检测方法.
一般相关文献主要综上所述,根据检索结果与查新点对比分析得知:在国内公开发表的文献中未见相同研究报道八,附件清单
附件1:国内一般相关文献清单
九,备注
本查新报告无"查新专用章",签字和骑缝章无效.
本查新报告涂改,部分复印无效.
检索结果及查新报告结论仅供参考.
附件1:国内一般相关文献清单
1.刘乔然.中国2007年部分地区鸡传染性支气管炎病毒分子流行病学研究[D].中国农业科学院:2016.
2.磨美兰,韦平,韦正吉,等.鸡传染性支气管炎病毒广西分离株的系统进化分析[C].2007,中国北京.
3.徐怀英,张伟,秦卓明,等.自然发生的1株传染性支气管炎病毒S1和N基因之间的重组[J].畜牧兽医学报,2016(10):1290-1295.
4.韦正吉,韦平,磨美兰,等.广西不同时期IBV分离株S1基因高变区的遗传变异分析[J].病毒学报,2016(02):126-132.
5.韦正吉.广西鸡传染性支气管炎病毒分子流行病学的研究[D].广西大学:2007.
6.孙宁.鸡传染性支气管炎病毒(793/B)M基因与截短M基因的克隆测序,原核表达及鉴定[D].山东农业大学:2016.
7.磨美兰,范文胜,黄柏成,等.鸡传染性支气管炎病毒(IBV)广西流行株3'端非编码区序列分析[J].基因组学与应用生物学,2016(03):457-463.
8.陈峰,周庆丰,廖秋生,等.鸡传染性支气管炎病毒中国分离株S1基因的序列分析[J].中国兽医科技,2005(07):515-519.
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