本站原创【摘 要 】目的:通过免疫组织化学(IHC)技术的应用不断提高了基层医院病理诊断的水平.方法:通过免疫学中抗原抗体结合反应,用特异性抗体检测组织、细胞内相应的抗原物质.结果:(1)明确诊断,鉴别疑难,(2)协助疾病判断预后,(3)指导疾病的治疗等.结论:(IHC)的应用大大提高了基层医院的诊断水平,且对医院临床科室的发展起到推动作用.
【关 键 词 】免疫组织化学,技术,基层医院
【中图分类号】R392-3【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2010)16-196-2
免疫组织化学技术基本原理:通过免疫学中抗原抗体结合反应,用特异性抗体(单克隆或多克隆)检测组织、细胞内相应的抗原物质,形成抗原―抗体复合物,此复合物上带有事先标记的标记物,通过与标记物相对应的检测系统,如酶底物显色反应可使之呈现某种颜色,从而可检测组织细胞内的抗原,以达到诊断、鉴别诊断和研究的目的.
免疫组织化学(IHC)在近十余年来已在国内广泛开展,几乎所有的病理科在日常工作中都需做几项甚至几十项IHC来辅助病理诊断,IHC已整合入外科病理(诊断病理),成为医院病理科不可缺少的辅助技术,它不仅能使病理诊断更精确,更有肋于肿瘤的正确分类分型,还能预测某些肿瘤的预后和提供治疗的依据[1].基层医院病理科近几年也在陆续开展,自从去年我科开展免疫组化以来,诊断水平大大提高,且对临床科室的发展起到了推动作用.但基层医院由于病种相对较少,人员少,因此要寻找一个比较适合、简单的方法才是行之有效的,而即用型抗体,尤其适合基层医院.
1即用型抗体的优点
1.1使用方便.
1.2对于不具备或基本不懂免疫组化技术的人,只要按照说明书的方法使用,也能获得理想的结果.
1.3不需要配置多种昂贵的微量加样器.
1.4特别适合于基层单位.
2即用型抗体缺点
2.1较浓缩型抗体贵.
2.2即用型抗体不可作为常备贮存抗体.
3抗体的选择
抗体选择原则:形态学基础+抗体特性,形态学基础等于病理医生的诊断水平,抗体特性等于特异性+敏感性.
目前常用的抗体分为四大类:
3.1上皮性标记物.
3.2间叶性标记物.
3.3神经及神经内分泌标记物.
3.4淋巴细胞标记物.
B细胞标记物.
其它.
4免疫组化在病理诊断和研究中的作用[2]
4.1判定细胞属性,以协助诊断,通过细胞属性的判定,确定肿瘤的来源如CK(细胞角蛋白)阳性提示肿瘤为上皮源性肿瘤,通过特定抗体标记出细胞内相应的抗原成分,如CK是上皮性标记,前列腺特异性抗原(PAS)仅见于前列腺上皮,甲状腺球蛋白(Tg)抗体时甲状腺滤泡性癌的敏感标记,而降钙素抗体是甲状腺髓样癌的特有标记.胶质肿瘤GFAP(胶质纤维酸性蛋白)阳性,平滑肌肌动蛋白阳性提示肿瘤为平滑肌源性,黑色素瘤、软组织透明细胞瘤呈HMB45(黑色素相关抗原)和melan-A(黑色素A)阳性,血管源性肿瘤CD34(内皮细胞标记物)阳性,胃肠道间质瘤CD117(原癌基因蛋白产物)阳性,B细胞淋巴瘤CD20和CD79a阳性.
4.2鉴定病变性质通过标记Ig轻链(κ、λ)可区分部分B细胞性淋巴瘤与B细胞反应性增生,前者常表达单一的Ig轻链(κ+/λ+),后者常为多克隆Ig轻链(κ+、λ+),而标记bcI-2蛋白在区别滤泡性淋巴瘤和反应性滤泡增生有相当意义.在滤泡性淋巴瘤,90%以上肿瘤性滤泡细胞有bcI-2的高表达,而在滤泡反应性增生时,滤泡反应中心的细胞不表达bcI-2蛋白,而套细胞则表达.
4.3发现微小转移灶某些癌的早期转移有时与淋巴结内窦性组织细胞增生不易区别.常用组织病理学方法要在一个组织中认出单个转移性肿瘤细胞或几个细胞时不可能的,而采用免疫组化方法(如用上皮性标志则十分有助于微小(癌)转移灶的发现.对转移性肿瘤也可借助免疫组化标记寻找原发瘤,如骨组织内有前列腺特异性抗原阳性细胞,提示前列腺癌转移.
4.4探讨肿瘤起源或分化表型人们对一些来源不明的肿瘤长期争论不休,最后通过免疫组化标记取得共识.如颗粒性肌母细胞瘤,曾被认为时肌源性的,但该肿瘤肌源性标记阴性,而神经源性标记阳性,证明为神经来源可能来自神经鞘细胞.分化很差的肿瘤病理上常按细胞形态分为梭形细胞肿瘤、小圆细胞肿瘤等,通过多种标记的联合应用,也可能确定来源.
4.5确定肿瘤分期判断肿瘤是原位还是浸润及有无血管、淋巴管侵袭与分期密切相关.常用病理方法判断有时是十分困难的,但用免疫组化法可获得明确结果.如采用层粘连蛋白和Ⅳ型胶原的单克隆抗体可清楚显示基膜的主要成份,一旦证实上皮性癌突破基膜,就不是原位癌.而是浸润癌,其预后是不同的.如乳腺肌上皮缺失加上基膜突破,就是浸润性癌.用第八因子相关蛋白、D2-40等显示血管和淋巴管内皮细胞的标记物则可清楚显示肿瘤对血管或淋巴管的浸润.对许多肿瘤的良恶性鉴别及有无血管或淋巴管浸润,这是主要的鉴别依据,同时也有治疗及预后意义.
4.6免疫组化标记中与预后有关的标记物大致可分为三类①类固醇激素受体:如雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)等,它们与乳腺癌的关系已获公认,性激素受体阳性者内分泌治疗效果较好,预后也较好.相似的结果也见于子宫内膜癌和卵巢癌.②肿瘤基因标记物,如癌基因CerB2,P53蛋白等,在肿瘤中高度表达者预后较差,而nm23蛋白高度表达者,肿瘤转移率较低,预后较好.③细胞增殖性标记物:如表皮生长因子受体(EGFR)、Ki67等,表达指数越高,表明其增殖指数越活跃,恶性度增高,预后不良,其中以恶性淋巴瘤、乳腺癌较为明显.而且在乳腺癌的研究中发现Ki-67、EGFR阳性者,淋巴结转移率高,并与激素受体的表达呈负相关.
4.7辅助的疾病诊断和分类人体的免疫性疾病,主要是自身免疫性疾病,如肾小球肾炎、皮肤自身免疫性疾病等,可用免疫组化方法对组织细胞内的免疫球蛋白、补体、免疫复合物等进行检测以辅助诊断.某些免疫组化的分类及分型也是在免疫组化的基础上建立的.内分泌肿瘤如垂体前叶腺瘤,根据其分泌功能可分为生长激素腺瘤、泌乳素腺瘤等10型,胰导细胞瘤的功能分类为胰导素瘤、高血糖素瘤等6种,恶性淋巴瘤根据瘤细胞表面标记不同可分为T细胞性、B细胞性.肾小球肾炎的免疫学分类亦需免疫组化或免疫荧光技术.
4.8寻找感染病因人体疾病的致病微生物中有的在常规病理检查中不易发现,尤其是病毒性致病微生物,由于其分子水平的结构,在细胞水平上难以发现,通过免疫组化方法则可明确发现病原体抗原部位以及定量,如巨细胞病毒(CMV)、人状瘤病毒(HPV)、单纯疱疹病毒(HSV)、乙型肝炎病毒(HBV)等,已有商品化标记物帮助解决病因诊断问题等.
4.9指导疾病的治疗如乳腺癌c-erbB-2(+++)是用赫赛汀(Herceptin)治疗的指征,胃肠道间质瘤CD117(+)提示可用格列卫治疗.