本站原创盐酸替罗非班为一种可逆性非肽类血小板表面糖蛋白受体拮抗剂,可与肝素联用,用于心绞痛病人,同时也适用于冠脉缺血性综合征病人进行冠脉血管成形术或冠脉内斑块切除术.本实验主要是在文献研究已确定的几种测定盐酸替罗非班有关物质的方法基础上,进一步择优,并对其进行验证,以确定最优实验方法.
通过对专属性、系统适用性、线性、定量限、检测线、精密度、溶液稳定性、耐用性、回收率进行验证,其专属性强,耐用性强,灵敏度高.表明此方法适用于盐酸替罗非班的有关物质测定.
1实验仪器与试药
1.1仪器
岛津LC-2010AHT型高效液相色谱仪,岛津国际贸易有限公司
戴安UltiMate3000双三元液相色谱仪（二极管阵列）,戴安中国有限公司
HWS12型电热恒温水浴锅,上海一恒科技有限公司
岛津LC-10Avp型高效液相色谱仪,岛津国际贸易有限公司
MettlerAE-100电子天平,梅特勒-托利多中国
PL-2002电子天平,梅特勒-托利多中国
1.2试药
辛烷磺酸钠,天津市光复精细化工研究所
磷酸,天津市北联精细化学品开发有限公司
乙酸钠,北京化学试剂二厂
乙腈,J.T.Baker
30%过氧化氢,天津市东方化工厂
氢氧化钠,北京化工厂
盐酸,永飞化工厂
磷酸二氢钾,天津市盛奥化学试剂有限公司
三乙胺,国药集团化学试剂有限公司
2实验方法
2.1色谱条件
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶；检测波长：226nm；流动相：乙腈-水-0.2mol/L乙酸钠（30：70：5）；流速：1ml/min；进样量：10μl.
2.2专属性
取盐酸替罗非班0.02g于100ml容量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,取上述溶液1ml于100ml容量瓶中,加流动相稀释至刻度,得2g/ml样品溶液,取10l注入液相色谱仪,记录色谱图.色谱图见
由图可知,流动相不干扰测定,盐酸替罗非班起始出峰时间为4.7分钟,有关物质能够与主峰分离,说明本法专属性强.
2.3系统适用性
取盐酸替罗非班0.02g于100ml容量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,取上述溶液1ml于100ml容量瓶中,加流动相稀释至刻度,得2g/ml样品溶液,依法测定,进样6次,记录色谱图.色谱图见图2.
2.4耐用性
取盐酸替罗非班0.02g于100ml容量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,取上述溶液1ml于100ml容量瓶中,加流动相稀释至刻度,得2g/ml
在更换色谱柱后,测定的主峰面积略微减小,在柱温、流动相组成发生微小变化时,基本不影响测定结果.本方法在测定条件有微小变化时能够满足测定要求.
2.5定量限
取本品对照溶液,加流动相逐级稀释,取信噪比10：1时的进样量作为定量限,分别配制6份,注入液相色谱仪,量取峰面积,计算相对标准偏差.记录色谱图,色谱图见图3.
由实验结果可知,本品经过稀释后,对照品达到定量限时的浓度约为1.5g/ml,进样六次,保留时间的相对偏差为0.56%,峰面积的相对标准偏差为1.05%,均符合规定.
2.6检测线
取本品对照溶液,加流动相逐级稀释,取信噪比3：1时的进样量作为定量限,取峰面积,记录色谱图,色谱图见图4
本品检测线浓度为1.0g/ml.
2.7线性
取对照品约0.025g于100ml容量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,得0.25mg/ml对照品溶液,取上述溶液0.4ml于10ml容量瓶中,加流动相稀释至刻度,得10g/ml对照溶液,分别精密量取0.25ml、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml置10ml容量瓶中,加流动相稀释至刻度,作为线性试验供试品溶液,分别取10l注入液相色谱仪,依法测定主峰面积,进行线性回归.得到回归方程为：A等于17216C-1324.6.相关系数R为0.9998.
2.8精密度
取盐酸替罗非班约0.02g于100ml容量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,取上述溶液1ml于100ml容量瓶中,加流动相稀释至刻度,得2g/ml样品溶液,配制6份,分别进样,测定本品的精密度.结果见表2
取盐酸替罗非班约0.02g于100ml容量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度得0.2mg/ml的溶液,作为供试溶液.精密量取供试品溶液1ml于100ml,加流动相稀释至刻度得2g/ml的溶液,作为对照溶液,分别室温下放置0,5,10小时,观察溶液稳定性.记录色谱图,供试溶液放置0小时、5小时、10小时的色谱图见图3.10.1～图3.10.3.对照溶液放置0小时、5小时、10小时的色谱图.
本品溶液放置10小时,溶液稳定,未发生明显变化.
2.10回收试验
5g/ml对照品溶液：取对照品约0.025g,加流动相溶解并稀释至10ml,得2.5mg/ml对照品溶液,取上述溶液0.2ml于10ml容量瓶中,加流动相稀释至刻度,得0.05mg/ml对照品溶液,再取0.05mg/ml对照溶液1ml于10ml容量瓶中,稀释至刻度,得5g/ml对照品溶液.
原料药溶液：取原料药0.25g于25ml容量瓶中,加流动相稀释至刻度,取上述溶液1ml于100ml容量瓶中,加流动相稀释至刻度,得100g/ml原料药溶液.分别取100g/ml原料药溶液1ml、0.7ml、0.5ml置10ml容量瓶中,加流动相稀释至刻度,得10g/ml、7g/ml、5g/ml原料药溶液.
分别取对照品溶液和原料药溶液各1ml置于10ml容量瓶中,加流动相稀释至刻度,得到高（1.5g/ml）、中（1.2g/ml）、低（1.0g/ml）三个浓度的混合液,三个浓度混合液各配制三份,取10l分别进样,并计算回收率,结果见表3
表3.11
结论：由以上结果可知,高、中、低三个浓度的回收率均符合要求.
3讨论：
专属性试验表明本品主峰与其异构体峰均能够分开,分离度符合规定；系统适用性实验表明分离度符合规定；耐用性试验表明流动相及其系统的微小变化能够满足测定要求；定量限浓度为1.5μg/ml；检测限浓度为1.0μg/ml；线性试验R为0.9998,线性符合规定；精密度试验的RSD值为3.44%.高、中、低三个浓度的回收率均在90%以上,符合规定