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安徽大学
本科毕业论文(设计)
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苏云金芽胞杆菌的分离与鉴定【黑体三号加粗居中,行距20】
【空行】
作者:孙旭安徽大学生命科学学院2005级生物技术专业,230601
指导教师:张萍萍安徽大学生命科学学院,230601【仿宋五号左缩进6字符】
【空行】
摘 要【黑体四号加粗居中,行距16,中空2字符】
目的:苏云金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis)作为使用最广泛的杀虫微生物之一,具有专一性强,对人畜无害,防治效果好,易生物降解及无残毒等优点.由于长期使用,昆虫抗性逐渐发展,发现新的BT菌株和新的cry基因,对于害虫控制具有重要的意义.方法:选择大蜀山天然林区和科学岛林区作为采样点采取土样,使用温度筛选法分离菌株,进一步通过对菌体伴胞晶体和菌落形态观察复筛.选用bt模式菌株以色列亚种和库斯塔克亚种作为对照,通过晶体蛋白SDS-PAGE和cry基因的PCR-RFLP对获得的菌株进行初步鉴定.结果:共采得150份土样,初筛得到987株芽胞杆菌,其中有508个菌落与典型的bt菌落类似.复筛确定3株BT菌株.晶体蛋白SDS-PAGE结果显示供试菌株与对照菌株的cry蛋白有一些差异,而cry基因的PCR-RFLP结果也显示,供试菌株与对照菌株存在很大不同.结论:分离得到3株苏云金芽胞杆菌,可能存在新的cry基因.【仿宋五号行距16,首行缩进2字符,"目的等"加粗】
【空行】
关 键 词:苏云金芽胞杆菌,分离,鉴定,PCR-RFLP,SDS-PAGE【关 键 词用分号分开,宋体小四号加粗,缩进2字符】
【空行】
IsolationandIdentificationofBacillusthuringensis【TimesNewRoman四号加粗,居中】
【空行】
Author:SunXu2005BiotechnologySpeciality,SchoolofLifeSciences,AnhuiUniversity,Hefei,230601
Advisor:ZhangPingpingSchoolofLifeSciences,AnhuiUniversity,Hefei,230601【TimesNewRoman五号左对齐,缩进2字符或恰当比例】
【空行】
Abstract【TimesNewRoman四号加粗居中】
Subject:Bacillusthuringiensis,whichhasbeenmostbroadlyusedasoneofinsecticidalmicroanis,isconcernedbymanycountriesallovertheworldbecauseoftheoutstandingfunctioninpestcontrolsince1901foundbyaJapanesescientist.Methods:Inthisexperiment,soilsampleswerecollectedfromnaturalforestedareainGreatShuHillandScientificIsland,150portionsofsoilsampleswerecollectedandotentialbacterialstrainswereisolatedbyusingtemperaturefilteringmethod.Results:Thesestrainswereidentifiedthroughobservingtheparasporalcrystalsandcolonialmorphology,andPCR-RFLP.ThecrystallineproteinwasanalyzedwithSDS-PAGE.Conclusions:ThreestrainsofBacillusthuringiensiswereisolatedandtherewouldbesomenovelcrygenes.【TimesNewRoman五号左对齐,首行缩进2字符】
Keywords:Bacillusthuringiensis,solation,dentification,PCR,SDS-PAGE
【空行】
目录【黑体四号加粗居中,行距21】
1引言等等等等等等等等等等等等等等等等1
1.1苏云金芽胞杆菌的发现等等等等等等等等等等等等1.2苏云金芽胞杆菌常见分离方法等等等等等等等等等等等1.3苏云金芽胞杆菌cry基因的鉴定等等等等等等等等等等1.4论文研究的意义和主要内容等等等等等等等等等等等 苏云金芽胞杆菌的分离与鉴定【黑体三号加粗居中】
【空行】
1引言【一级标题,黑体小四号加粗左对齐,行距20无缩进,以下同】
虫害是制约农作物高产,稳产的重要因素.全世界虫害造成的损失约占农作物总收成的13%,每年大约损失数千亿美元.为了控制虫害,化学杀虫剂一度被滥用,导致环境污染,农药残留等不良后果.利用昆虫病原菌进行生物防治替代化学杀虫剂,实施生态农业,已成为国际上发展的趋势.苏云金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis,Bt)作为世界上生产量最大的生物农药杀虫剂,被广泛应用于控制多种鳞翅目,双翅目,鞘翅目的害虫.Bt的伴胞晶体蛋白(parasporalcrystalprotein),又称杀虫晶体蛋白(insecticidalcrystalprotein,ICP)或δ-内毒素对敏感昆虫有强烈毒性而对高等动物和人无毒性.
1.1
1901年日本学者石度繁从患猝倒病的家蚕幼虫中分离到第1个产生晶体的芽胞杆菌.1.2苏云金芽胞杆菌的常见分离方法
1.2.1二级标题【或四级标题,宋体小四号,左对齐,行距20,以下同】
1.2.2
等
1.3苏云金芽胞杆菌cry基因及鉴定
等
1.5论文研究的意义和主要内容
2材料和方法【一级标题,黑体小四号加粗,左对齐,行距】
2.1材料2.2仪器设备
2.3方法
3.1初筛
内容部分【小四号,首行左缩进2字符,行距20.中文为宋体,英文为TimesNewRoman,种属名用斜体.以下同.】
3.2复筛
等
3.2.2初筛菌株伴胞晶体观察【标题,宋体小四号,左对齐,行距20】
对初筛的508个菌株进行制片,观察伴胞晶体,经伴胞晶体观察初步确定有3株菌株含有伴胞晶体,可能是苏云金芽胞杆菌,将其编号为bt1,bt2和bt3.
其中bt1为菱形晶体,bt2为圆形晶体,bt3晶体无明显能辨别的形状.与标准菌株相比较均有有明显差异.
[图略]
图5菌株bt1的伴胞晶体(10×100倍)【图题在图下,宋体小四号居中,中英文对照.有图注时,图注用五号字体】
Fig.5Parasporalcrystalofstrainbt1(10×100folds)
等
表3标准菌株与供试菌株的生长曲线分析
Table3.Growthcurveanalysisofteststrainsandcontrols
菌株
strains延滞期lagphase对数生长期logarithmicphase稳定期stationaryphaseBt11-34-2122-33Bt21-34-1920-33Bt31-34-2021-334D11-67-2122-334Q21-67-1920-33【表题在上,宋体小四号居中,中英文对照.】
4结与
4.1
本次试验通过对大蜀山和科学岛共150份土样处理筛选只得到3株菌株,菌株出土率低苏云金芽杆菌的筛选分离工作量大,Bt菌落筛选只能通过菌落形态观察和伴晶体显微观察,而没有针对性的选择培养基进行选择筛选,因此,寻求一种选择培养基是一项有意义的工作,可以减少工作量,避免错筛,翻筛.2
PCR-RFLP方法最大优点在于能发现菌种中未知的新基因克服了前人方法的如需要合成多对引物,鉴定范围过窄,只能鉴定已知基因等缺点3
bt菌株的鉴定,需要显微镜镜检,形态学鉴定SDS-PAGE,晶体蛋白鉴定,PCR-RFLP鉴定等,本次试验鉴定出bt1,bt2,bt3三株菌均有晶体蛋白的存在,bt通过PCR-RFLP鉴定可能含有新的cry基因.另外,通过12对常见引物的PCR反应bt和bt虽然未鉴定出cry基因,但不排除稀有cry基因的存在,需要使用稀有引物进行验证.中国幅员辽阔许多地区具有独特的地理环境Bt资源的开发非常有限国外如墨西哥,巴西,美国等均对本国Bt资源进行了系统的,全面的调查与发掘按照海拔,气候对Bt菌株和cry基因的分布总结出可借鉴的规律并发掘出一大批新型菌株没有全国范围Bt资源系统的调查开发潜力巨大对于发现新型菌株具有重要的作用与意义.
参考文献【黑体四号加粗,左对齐,段前段后各0.5行,行距20】
等
胡晓婷,宋健,王容燕,等.对铜绿丽金龟幼虫有活性的苏云金芽孢杆菌菌株的分离及鉴定[J].华北农学报,2016,23(6):81-83【自动排序,五号左对齐,中文为宋体,英文用TimesNewRoman】
姚淑霞.海南热带雨林苏云金芽孢杆菌的分离及其两分离菌株的生物学特性鉴定[D].南宁:广西大学硕士学位论文,2016
等
Crickmore,Zeigler,DR,Feitel,etal.RevisionoftheNomenclatureforBacillusthuringiensispesticidalcrystalprotein[J].Mcrobiol.Mol.Biol.Rev,1998,62:807-813.
BacillusthuringiensisToxinNomenclatureWebsite,lifesci.sussex.ac.uk/home/Neil_Crickmore/Bt/
等
安徽大学生命科学学院,基础生物学实验指导[M],2004
等
附录A【黑体四号加粗,行距20】
Cry1/7/9的PCR产物和限制性酶切长度多态性【宋体小四号加粗居中】
致谢【黑体四号加粗居中,字间空2字符】
感谢我的导师,他严谨细致,一丝不苟的作风一直是我工作,学习中的榜样,他循循善诱的教导和不拘一格的思路给予我无尽的启迪这论文的每个实验细节和每个数据,都离不开的细心指导.开朗的个性和宽容的态度,帮助我能够很快的融入我们这个实验室
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