空气微生物的检验技术

摘 要：目的：探讨空气微生物的检验措施.方法：通过实验室的科学检验,掌握空气微生物的属性与致病因素,总结出系统的检验措施和相应的控制方法.结论：科学准确的掌握空气微生物的检验措施,把握致病规律,才能为有效的控制和预防相关疾病提供可靠的依据.

关 键 词：空气微生物；检验；细菌

【中图分类号】R446.5【文献标识码】B【文章编号】1672-8602（2014）01-0188-01

存在于空气中的微生物.是主要的空中浮游生物.对较干燥环境和对紫外线具有抗性的种类,主要有附着于尘埃上的从地面飞起的球菌属（包括八叠球菌属在内的好氧菌）；形成孢子的好氧性杆菌（如枯草芽孢杆菌）；色串孢属等野生酵母；青霉等霉菌的孢子等.下面将空气微生物的检验技术分析汇报如下.

1各类微生物的基本检验程序

空气中微生物检验主要分为细菌、病毒、真菌、立克次体类的检验.

2几种常见空气微生物采样

方法及细菌菌落总数测定

2.1Andersen采样器

2.1.1构造：新型采样器是Andersenl958年研制而成由采样胶体、流量剂、压力计和抽气泵组成.

2.1.2特点：①采集空气微粒范围宽；

②采样效率高；

③生物失活率低；

④敏感性高；

⑤操作简便；

⑥应用范围广,常用于空气致病微生物的采集.

2.1.3操作步骤：①消毒

采样器的消毒方法有3种：75%酒精；高压蒸气灭菌：用于采样头的消毒；环氧乙烷消毒.

②有关参数设定：

流量,28.3L/min,固定流量抽吸空气,流量准确与否是该采样器操作的关键所在,流量不准或未经校正的采样器不可使用.真空度,0.1354kPa.若真空度不够,可影响气流速度,从而影响采样效率.

③平皿制备

采样用培养基平皿要提前一天准备好,每个样品需6个平皿,预置37℃18～24h培养,无细菌生长,即可用于采样.

④采样高度

根据采样目的而定,一般置于人的呼吸带高度,大约1.0～1.5m左右,并且采样人员应远离采样头.采集时间要根据现场微生物污染程度而定.

⑤培养

打开采样器,盖上平皿盖.细菌培养37℃培养48h,真菌培养28℃培养72h.

⑥菌落计数：计数方法可以采用分段计数及菌落计数器进行.一般以菌落形成单位表示.一般每个平皿最多不超过250cfu.

2.2THK-201型采样器

2.2.1构造：THK-201型采样器是在JWL型采样器基础上改进而成.基本构成包括：采样头、流量计、抽气泵、可调电路.

2.2.2特性：①采样头的筛孔（隙）为可调式；

②捕获率高；

③适应范围广,在不同环境通过调节筛孔来采集不同大小的微粒提高了其应用范围,可采集细菌、真菌、病毒、立克次体、原生动物、植物、花粉、藻类等,适用于环保、生物工程、医疗卫生、卫生防疫、工农牧业、食品加工业等；

④功能齐全.

2.2.3操作步骤：①平板制备

制作平皿培养基应注意厚薄均匀,保证无菌.琼脂浓度要较其他采样方法略高一点（≤2.4%）,过高过低均会影响采样效率.

②仪器相关参数

电源,工作电压：220V；转速,选档,定时范围；流量,5～35L/min；采样筛头,最小狭缝≤20μm,最大500μm.根据需要分级调节,使用时要对环境中微生物有一个大略估计,以便进行筛孔调节.

③培养

方法和时间同Andersen采样器.

2.3自然沉降采样法

2.3.1特点：①简便易操作,不需特殊采样器,只需采样的平皿培养基.

②能反映沉降细菌的数量,特别是医院的烧伤外科、手术室、人流室等一些相对空气流动性不大,但空气中微生物在静止时下落到物表,造成污染,更严重的造成院内感染.

③可用于粗略反映空气中细菌污染状况.

④此法不足之处：用下落菌推算空气中悬浮菌量,有推理上的错误.比较公认的是奥梅梁斯基的公式来推算浓度,他认为在100cm2培养基表面,5min内能落下约10L空气中所含菌量.标准细菌种类较少.采样条件要保证无菌状态,十分难以控制[1].

2.3.2自然沉降法采样的操作步骤：①培养基的制备：

一般采用9cm直径平皿制作.细菌用普通营养琼脂,真菌用沙堡培养基或察氏培养基.制备好的平板应置35～37℃预培养18～24h,选无菌生长的平皿用于采样.

②选择检测点：

室内面积≤30m2沿一对角线上取三点,即中间一点两端各距墙1m处各取一点,室内面积>30m2,设东、南、西、北、中5个点,各点均距墙1m,采样高度0.8～1.5m.若使用采样器监测时,采样器应距地面高度33cm,离门窗及人员流动1m以上,且采样器与采样者要保持一定距离（50cm）,防止采样者自身细菌被吸入采样器而影响检测结果.室外采样要根据该地区气象、交通、大气污染程度、建筑物布局、有无树林等进行合理选点,选点数不定,每个点采样高度1.5m以上.可以一个点同时放置两个平皿,以平均菌落数代表该点的菌落数.

③暴露平血时间：

原则是保证客观反映采样点情况,采样后平皿中生长的菌落数要便于准确计数,太多以至于无法计数将造成较大偏差,一般洁净室内暴皿时间可在5～30min,一般室内较洁净的地方,多采用暴皿5min即可.

④培养：

细菌样品35～37℃培养48h,真菌样品置28℃培养72h.

2.4JWL型采样器

2.4.1结构：由采样头、流量计、抽气泵、电源电路4部分构成.

2.4.2特点：①采样的平皿可以转动,使平皿上菌落均匀分布；

②交一直流两用,应用简便；

③自动按时采样,可采细菌和病毒；

④但对空气中占大多数的粒子捕获率低.

2.4.3操作步骤：①平皿制备

细菌用普通琼脂,真菌用选择性培养基（如察氏培养基）.平皿要求厚薄均匀,表面水平,加培养基量4.5ml,琼脂浓度1.8%～2.4%为宜.

②采样相关参数的调整

电源,220V,备24V直流蓄电池；流量调节,25～30L/min；空气压力,采样系统98～245kPa,电气系统为86.6～106.6kPa；采样时间,一次不得超过15min；采样高度,1.0～1.5m[2].

③培养

同Andersen采样法.