本站原创[摘 要 ] 目的 观察消化时间对大鼠胰岛分离纯化产量的影响,筛选出获取高产量胰岛素的最佳消化时间. 方法 将75只雄性SD 大鼠根据随机化原则按消化时间分为5组：Ⅰ组（10 min）、Ⅱ组（12.5 min）、Ⅲ组（15 min）、Ⅳ组（17.5 min）和Ⅴ组（20 min）,每组15只.通过胆总管灌注胶原酶Ⅴ来消化大鼠胰腺,分离胰岛,采用不连续密度梯度Ficoll离心法纯化胰岛.以双硫腙染色鉴定胰岛,丫啶橙/碘丙啶染色鉴定胰岛细胞活率,根据胰岛直径计数所获胰岛的数量及胰岛当量,葡萄糖刺激胰岛素释放试验评估胰岛功能. 结果 分离的大鼠胰岛具有较好的质量,胰岛纯度为95%左右,活率为90%左右,体外培养中生长良好.在不同消化时间下,各组胰岛产量由低到高为：10 min组<20 min组<12.5 min组<17.5 min组<15 min组.消化时间在15 min时,获得胰岛产量最高（P < 0.05）,获得的胰岛数量和IEQ量分别为445.27±66.50和614.46±85.50.其次为17.5 min组,获得胰岛数量和IEQ量分别为401.80±62.80和539.84±76.89.在低糖和高糖刺激下胰岛素释放分别为（1.346±0.128） ng/mL和（2.565±0.208） ng/mL,差异具有统计学意义（P < 0.05）,刺激指数为1.908±0.152,提示胰岛细胞功能良好. 结论 进行大鼠胰岛分离纯化时最适宜的胶原酶浓度在最佳消化时间为15～17.5 min,可获得稳定高产量的胰岛,过短和过长的消化时间都是不适宜的.
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[关 键 词 ] 消化时间；大鼠；胰岛；产量
[中图分类号] R2-33[文献标识码] A[文章编号] 1674-4721（2012）05（b）-0027-03