人肝癌靶向性CD80基因表达重组腺病毒载体的构建鉴定

摘 要 　目的：构建人肝癌靶向性CD80基因重组腺病毒载体.方法：首先,从人基因纽DNA中克隆AFP增强子、启动子,利用腺病毒穿梭质粒pShurtle和pShuRe-CMV,采用AFP增强子替换CMV启动子,构建合有AFP启动子和增强子的穿梭质粒,命名为pshurtle-AFP.将人CD80基因克隆到pshutne-AFP的AFP增强子和启动子之后,构建pshuttle-AFP-CD80质粒.再将其与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化E.coli BJ5183,利用同源重组构建腺病毒质粒pAd-AFP-CD80.以获得的重组子转染AD293细胞后制备重组腺病毒,并对重组的病毒进行鉴定和病毒滴度测定.结果：测序结果与Genebank中公布的AFP启动子、核心增强子和CD80基因序列相符.双酶切结果与预期结果相符.Pac I酶切结果与目的结果一致.穿梭质粒pshuge-AFP-CD80和腺病毒质粒pAd-AFP-CD80经酶切和PCR鉴定均获得期望大小的目的片段.结论：成功的构建了人肝癌靶向性pAd-AFP-CD80腺病毒栽体,为CD80基因在肝癌靶向性治疗的研究奠定了基础.