HPLC法测定祛风通痹胶囊中士的宁的含量

【摘 要 】 目的 采用高效液相色谱法测定祛风通痹胶囊中士的宁的含量.方法 选用C18色谱柱；流动相：正己烷-二氯甲烷-甲醇-三乙胺(47.5∶47.5∶5∶0.4)；检测波长：280 nm.结果 本方法的回收率为97.76%,RSD等于1.75%(n等于6).结论 HPLC法准确,重现性好,可用于祛风通痹胶囊的质量标准.

【关 键 词 】HPLC法；士的宁；祛风通痹胶囊

Determination of strychnine in qufentongbi capsules by HPLC

WANG Zhi-wei,JI Ling,SONG Yue.Heilongjiang Jiamusi Institute for Drug Contrl,Heilongjiang 154007,China

【Abstract】 Objective A HPLC method was developed for the contents determination of strychnine in qufentongbi capsules.Methods The C18 column was used with a mobile phase wasn-hexane-dichloromethane-methanol-Triethylamine(47.5∶47.5∶5∶0.4).The detection welength was 280 nm.Results The erage recovery was 97.76%,RSD等于1.75%(n等于6).Conclusion The method was accurate and reliable.It can be used for the quality control of qufengtongbi capsules.

【Key words】HPLC, Strychnine ,Qufengtongbi Capsules

祛风通痹胶囊是由三七、延胡索(制)、马钱子(制)等十二味中药组成的传统医院制剂,具有除湿通络,活血化瘀的功效.用于痹症,肩周炎,肌肉关节疼痛,屈伸不利,以及风湿性关节炎、类风湿性关节炎见以上证候者.其中马钱子(制)中的士的宁既是治疗风湿痹症的活性成分,又是毒性成分,笔者根据中国药典［1］中马钱子的用量,对方中马钱子的用量进行折算,采用HPLC法对方中的士的宁进行了含量测定.方法简便、准确、重复性好,适用于该制剂的质量控制.

1.仪器与试药

Agilent1100自动进样高效液相色谱仪(安捷伦科技有限公司)士的宁(中国药品生物制品检定所 批号0705-200004 含量测定用).样品(医院提供 批号：080711、080712、080713).所用试剂甲醇、乙腈为色谱纯,其他试剂均为分析纯.

2.方法与结果

2.1 色谱条件［2］ 色谱柱：AgilentC18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相：正己烷-二氯甲烷-甲醇-三乙胺(47.5∶47.5∶5∶0.4)；检测波长：280 nm； 流速：1.0 ml/min,柱温：30℃,进样量：5 μl.上述色谱条件下,理论板数按士的宁峰计不低于2000.见图1.

2.2 对照品溶液的制备 精密称取士的宁对照品10.25 mg,置100 ml量瓶中,加醋酸乙酯溶解并稀释至刻度,制成每1 ml含0.102 5 mg的溶液,作为对照品溶液.

2.3 供试品溶液的制备［2］ 取本品20粒内容物,精密称定,混匀,研细,取6 g,精密称定,置250 ml圆底烧瓶中,加浓氨试液4 ml及氯仿25 ml,加热回流50 min,放冷,滤过,残渣加氯仿洗涤4次,每次5 ml,并入滤液,置分液漏斗中,用硫酸溶液(3→100)振摇提取5次,每次15 ml,合并酸液,用浓氨试液调节pH值至9~10,用氯仿振摇提取5次,每次20 ml,合并氯仿液,蒸干,残渣加醋酸乙酯适量使溶解,转移至5 ml量瓶中,加醋酸乙酯至刻度,摇匀,作为供试品溶液.

2.4 线性关系考察 分别精密量取上述对照品溶液0.5、1、2、4、8 μl照“2.1”色谱条件分别进样,记录色谱图,以进样量为横坐标(μg),色谱峰面积A为纵坐标绘制标准曲线.计算士的宁的回归方程为A等于1 525.930 2X+25.312 8,r等于0.998 3结果表明,士的宁在51.25~820.0 μg范围内线性关系良好.

2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液各5 μl,重复进样5次,测定峰面积,结果士的宁峰面积的RSD为0.5%.

2.6 重复性试验 取样品(批号080711),平行称取5份,按“2.3”方法制备,进样,测定,计算.结果平均含量为0.045 mg/粒,RSD为2.1%.

2.7 稳定性试验 精密吸取供试品溶液(批号080711)各5 μl,在0、2、4、6、8 h进样,测定峰面积,结果士的宁峰面积的RSD为1.5%,表明士的宁在8 h内稳定.

2.8 加样回收率试验 取已测定含量的样品(批号080711,含量为0.045 mg/粒,平均装量为0.432 g/粒)样品6份,各精密称定3 g,置250 ml圆底烧瓶中,分别加入上述对照品溶液2.4、3.0、3.6 ml,按2.3方法制备,进样,测定,结果见表1.

2.9 样品测定 分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各5 μl,注入色谱仪,按“2.1”色谱条件测定峰面积,以外标法计算士的宁含量,分别为0.045 mg/粒(批号080711)、0.055 mg/粒(批号080712)、0.050 mg/粒(批号080713).

3.讨论

3.1 检测波长的选择 笔者通过紫外光谱扫描,表明样品和士的宁对照品的图谱基本一致,且在280 nm处有最大吸收.

3.2 流动相的选择 笔者参考文献使用乙腈-1%的冰醋酸(10∶90)为流动相,但此流动相不能较好地将对照品峰与杂质峰分离.而本试验确定的流动相却能达到满意的结果.